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紧接着是电泳、转模、免疫反应、显影等等一系列后,通过特殊的抗体和试剂,就能够显示目标蛋白的胶片。
将胶片进行扫描或拍照,用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值……
这个过程很复杂,也相对漫长,更需要耐心。
不过,方子业反正已经下了门诊,来到实验室里,就一步一步地按部就班来做。且旁边还有洛听竹帮点小忙。
最后呈现出结果后,洛听竹欣喜异常:“方师兄,你今天这个条带显示很清楚欸,上一次范师兄跑出来的是哑铃状的。”
说完,她偏头看向方子业的成片,条带清晰、没有杂带、背景干净!
“呈哑铃状一般配置胶有问题,另外还有一种可能是样品中含有太多杂质,没有离心下来,然后杂质沉积在孔的中间,蛋白自然被推挤到两边。”
“配好胶,不合格的坚决不用,不要铤而走险。”方子业仔细想了一下原理,如此给洛听竹解释。
“那如果有条带拖尾呢?”洛听竹想了一下,又问了一个问题,应该是她跟着别人做的时候,看到过这样的情况。
“条带拖尾的话,一般是蛋白量浓度高或者,孵一抗浓度和时间太长。”
“蛋白含量高的话,可能是前期的文献准备没有确定好,我认为最有可能的是因为一抗浓度太高,作用时间太长引起。”
“当然也有其他原因。”方子业再次看了看自己的成片。
HK2与β-actin(肌动蛋白)内参两个条带,共有过表达、正常以及沉默三个组。
肿瘤细胞实验的内参,特别是涉及糖酵解通路的细胞实验内参,是不能选用常见的GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)的。
“你这张图,直接用prism进行作图就可以用了吧?”洛听竹继续问。
“应该差不多吧,条带的厚度灰度差距还是蛮明显的。拍个照,拍个照……”方子业赶紧让洛听竹也帮忙拍一张。
洛听竹欣然答应,灵动得如同一只勤劳的小松鼠。
而方子业此时,看着学识点飞速跳动到了134,一下子增加了足足七十点的学识点,也是知道啊,这一次的WB实验,在这一个课题之中的作用占比不小,可能是支撑整个课题规模的小骨架了。
“这张照片拍得怎么样?”洛听竹拍完后,问方子业。
方子业泛出姨母笑,而洛听竹则以为自己拍照的水平还不错,于是又咔咔地来了几张。
然后就是清理实验台并清洗相应的实验器材了。
一切结束,方子业建议:“洛师妹,辛苦了,一起去吃个宵夜吧?”
洛听竹这会儿正在左右翻看着WB成图的照片,歪着头点了一下:“好呀。”
……
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